【产品简介】
本品是从细胞或组织中提取总RNA的试剂，本品对人、动物、植物以及细菌样品的RNA，均有较好分离提取效果。zKrizol在破碎和裂解细胞时能确保RNA的完整性。加入氯仿或Chloroformsafer氯仿替代物后离心，样品分成水样层、中间层和有机层，RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来回收。zKrizol抽提的总RNA可用于反转录为cDNA、RNA印迹分析、斑点杂交、poly（A）+筛选、体外翻译、RNA酶保护分析等后续实验。
【适用范围】 1. 人源样本：人的细胞、组织、血清等。2. 动物源样本：各种实验动物（如小鼠、大鼠、兔子等）的细胞、组织等。3. 植物源样本：植物的叶片、根、茎等组织。4. 微生物源样本：细菌、酵母等微生物的细胞。
【自备试剂】 RNase-Free water、氯仿或Chloroformsafer氯仿替代物、异丙醇、75%乙醇（RNase-Free water配制）、0.5% SDS（RNase-Free water配制，可选）、甲酰胺（可选）。
【操作示例】
1. 样品预处理
（1）植物组织：取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在zKrizol中研磨，研磨要迅速，建议不要超过60s。大约100 mg叶片使用1.0 mL zKrizol；
（2）动物组织：取新鲜或-70℃冻存组织，每30-50 mg组织加入1.0 mL zKrizol，匀浆仪匀浆。样品体积一般不要超过zKrizol体积的10%；
（3）各类贴壁细胞：每10cm2细胞面积加1.0 mL zKrizol裂解；
（4）各类悬浮细胞：离心沉淀细胞。加入zKrizol，用移液器吸打以裂解细胞。每5-10×106的动物、植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加1.0 mL zKrizol裂解。
2. RNA提取
（1）将匀浆样品在15-30°C条件下孵育5 min。
可选步骤：4℃ 12000 rpm（约13400×g）离心10 min，取上清。注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应去除后取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
（2）每1.0 mL zKrizol加入0.2 mL氯仿，充分颠倒混匀。4 ℃ 12000 rpm（约13400×g）离心15 min。离心后混合物分成三层：下层苯酚/氯仿层，中间层，上层无色的水样层，其中RNA存在于水样层中，水样层的体积大约为所加zKrizol体积的60%。
3. RNA沉淀
将适量水样层转移到新离心管中（若同时分离DNA和蛋白质，有机层和中间层请予以保留）。加入等体积异丙醇，充分混匀。若RNA产量少，可将混合的样品在-20℃孵育10-30 min（此步可低温过夜），4℃ 12000 rpm（约13400×g）离心15 min。RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后沉淀附着于试管壁和管底。
4. RNA的漂洗
吸去上层悬液。每1.0 mL的zKrizol加入1.0 mL 75%乙醇（RNase-Free water配制），洗涤RNA沉淀1-2次，4℃ 12000 rpm（约13400×g）的离心力离心3-5 min。
5. RNA的溶解
室温干燥RNA沉淀，用一定剂量的RNase-Free water或0.5% SDS溶液（RNase-Free water配制）或100%甲酰胺（同位素标记时用甲酰胺溶解）溶解RNA。
附：六步法RNA提取简明流程：
1. 预处理的样本中加1.0 mL zKrizol试剂，裂解样本；
2. 每1.0 mL zKrizol加入0.2 mL氯仿或者0.1 mL Chloroformsafer氯仿替代物，振荡混匀，4℃或室温下，12000 rpm（约13400×g）离心15 min；
3. 取上层400-500 μL至新样本管中，加等体积异丙醇，颠倒混匀，12000 rpm（约13400×g）离心10 min；
4. 加1.0 mL 75%乙醇洗涤沉淀，12000 rpm（约13400×g）离心3-5 mim，弃上清；
5. 重复第4步；
6. 室温干燥3-5 min，加入适量（推荐30-100 μL）RNase-Free water，溶解沉淀。
【注意事项】
1. zKrizol抽提RNA时要戴手套和护眼罩，避免本品接触皮肤和衣服。为避免呼吸道吸入，建议在通风橱内完成操作，提取过程温度在15-30℃即可。本品接触皮肤或者不慎吞服，会导致灼伤，本品接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗，若感不适，请及时就医；
2. 所有离心步骤，若不具备低温条件，可选择室温（RNA得率低的珍稀样品除外）；
3. 第5步离心管中剩余液体可短暂离心，然后用枪头彻底将液体吸出，以免残留酒精影响后续实验，但注意不要吸掉沉淀；
4. 沉淀可置于55℃水浴促进溶解。晾干步骤不要太久，以免导致过分干燥，沉淀难以溶解；
5. Chloroformsafer氯仿替代物，在RNA提取时可以替代氯仿。
