
【储存条件】 15-25℃保存,室温运输。
【产品简介】
本产品采用独特的基因组DNA清除/RNA吸附通用柱技术配合特殊试剂配方,适用于各种普通植物、多糖多酚植物和真菌的RNA提取;提取过程无需使用酚氯仿、β-巯基乙醇等有毒试剂,也无需耗时的醇类沉淀,即可高效去除基因组DNA、杂蛋白及其他杂质,提出高质量的RNA,可用于反转录PCR、荧光定量PCR、高通量测序建库等实验。
【产品组分】

【注意事项】 使用前必读
1. 所有离心步骤如未加说明,均可在常温进行。
2. 需要自备无水乙醇,首次使用试剂盒前,请参考瓶上标签,在漂洗液RW中加入指定量无水乙醇,并在瓶身及瓶盖做标记,混匀后方可使用。
3. 使用新鲜样本时,若不能及时提取,将样本立即置于液氮中,速冻后于-85至-65°C保存,并避免反复冻融;为了避免RNA的降解,样本的采集与保存应尽可能迅速。
4. 液氮研磨时,为防止样本融化,需及时补给液氮。
5. 样本从液氮中取出,需立即加入裂解液混合均匀,请勿将样本单独置于室温,样本融化或样本与裂解液混合不均匀都会导致RNA降解。
6. 裂解液FEA和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
7. 经常更换新手套,并使用无RNase的塑料制品和枪头,避免RNase污染。
8. 本试剂盒可去除体系中大部分的DNA污染,纯化获得的RNA通常无需使用DNase I 处理即可用于下游实验操作。不同样本核酸含量相差大,如果下游实验对痕量DNA十分敏感,可以使用DNase I 进一步清除DNA污染。
【操作示例】
1. 液氮中研磨适量植物/真菌组织成细粉后,取50 mg-100 mg细粉转入1.5 mL离心管,立即加入600 μL裂解液FEA,剧烈涡旋振荡30秒,使样本与裂解液充分混合均匀。13,000 rpm离心5 min,立即进行后续操作。
注意:由于植物多样性非常丰富,而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的RNA含量都不相同,请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。
2. 取裂解物上清约500 μL至DNA清除/RNA吸附通用柱(已放入收集管中,以下简称 (通用柱) 中,13,000 rpm离心30秒,弃掉通用柱,保留收集管中的滤液 (RNA在滤液中)。
注意:上清体积可根据实际情况做出相应调整。
3. 向收集管中加入0.5倍滤液体积的无水乙醇 (约250 μL,根据上清实际情况调整),振荡混匀15秒。
注意:若加醇后出现浑浊或有絮状物产生,属正常现象,可将混合液 (包括絮状物) 都加入通用柱中继续进行后续操作。
4. 立即将上述混合液转移至一个新的通用柱内(已放入收集管中),静置1分钟,13,000 rpm 离心30秒,弃滤液,将通用柱放回收集管。
注意:吸附柱容积为750 μL,若混合液超过该体积请分多次进行上柱。
5. 向通用柱中加入700 μL去蛋白液RW1,室温放置1分钟,13,000 rpm离心30秒,弃滤液。
6. 向通用柱中加入500 μL漂洗液RW(使用前请检查是否已加入无水乙醇),13,000 rpm离心30秒,弃滤液。
7. 重复步骤6一遍。
8. 将通用柱放入空收集管中,13,000 rpm 离心2分钟。
9. 将通用柱转入一个新的RNase free 1.5mL离心管中, 向吸附柱膜中央悬空滴加30-50 μL RNase-free H₂O,室温放置1分钟,13,000 rpm离心1分钟。
注意:洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积最好不少于30 μL,体积过小降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。
注意:以下步骤都可以帮助提高RNA产物浓度:
(1)RNase-free ddH2O于90℃预热;
(2)将第一次洗脱液重新加入吸附柱进行洗脱。
10. 提取的RNA可直接用于下游实验或-85至-65°C保存。