【储存条件】 室温(15-25℃)保存。
【产品简介】
本试剂盒适用于从植物组织，特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织中快速提取RNA。整个过程不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。简单、快速，单个样品操作一般可在25分钟内完成。采用创新的基因组DNA清除柱技术可以有效清除gDNA残留。离心吸附柱中采用的硅基质材料为进口特制新型材料，配合加强版裂解液配方可以最大限度的回收高纯度RNA。适用于各种下游应用实验，如RT-PCR、RT-qPCR、体外转录、分子克隆等。
【产品组分】
【适用范围】
本试剂盒适用于从植物组织，特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织，包括复杂中草药如石斛/丹参/雪莲/人参、复杂淀粉种子如水稻/小麦/玉米种子、复杂果实如葡萄/蓝莓/草莓果实、复杂抗逆植物如冬青/松针/沙棘/胡杨、复杂花卉月季/梅/牡丹花、复杂多糖植物紫菜/仙人掌/芦荟水稻种子等快速提取RNA。
【注意事项】 使用前必读
1. 所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。
2. 需要自备β-巯基乙醇、无水乙醇。
3. 首次使用试剂盒前，请参考瓶上标签，在漂洗液RW中加入指定量无水乙醇，并在瓶身及瓶盖做标记，混匀后方可使用。
4. 使用新鲜样本时，若不能及时提取，将样本立即置于液氮中，速冻后于-85至-65°C保存，并避免反复冻融；为了避免RNA的降解，样本的采集与保存应尽可能迅速。
5. 液氮研磨时，为防止样本融化，需及时补给液氮。
6. 样本从液氮中取出，需立即加入裂解液混合均匀，请勿将样本单独置于室温，样本融化或样本与裂解液混合不均匀都会导致RNA降解。
7. 裂解液CLB和RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
8. 经常更换新手套，并使用无RNase的塑料制品和枪头，避免RNase污染。
9. 关于DNA的微量残留：
本产品采用独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，可以清除绝大部分的DNA残留，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
（1）选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
（2）选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
（3）将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。
（4）在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱CR3上进行DNase I 柱上消化处理。
【操作示例】
1. 植物样本在液氮中迅速研磨成粉末，液氮研磨后的样本如不立即进行下一步操作，请置于-85至-65°C保存。
2. 称取100 mg-200 mg粉末，加至65°C预热的裂解液CLB（已加有巯基乙醇)离心管中，立即剧烈涡旋振荡30 - 60秒，使其充分裂解，降低粘稠度并有助于提高产量。
注意：水分少的样品如叶片种子等可加100 mg-150 mg，水分多的样品如草莓西瓜果实可多适当增加样本量。
注意：实验前，取1 mL裂解液CLB至离心管内(如果CLB有析出或者沉淀需先置于65°C水浴重新溶解)，在裂解液CLB中加入5% β-巯基乙醇(1 mL CLB加50 μL β-巯基乙醇)。颠倒混匀后65°C水浴中预热。多个样品按照比例放大准备。此裂解液最好现用现配。
3. 将裂解物放回65°C水浴中(5-10min)，期间偶尔颠倒1-2次帮助裂解。13,000 rpm 离心10分钟，沉淀不能裂解的碎片。
4. 转移上清至新的1.5 mL RNase-free离心管中，加入0.5倍上清体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀，但不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。(若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。)
5. 将混合物转移(每次小于700μL，超过该体积请分多次进行）至一个基因组清除柱中，（清除柱放入收集管中）13,000 rpm 离心2分钟，弃掉废液。
注意：确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。
6. 将基因组DNA清除柱子放至新的2 mL离心管内（不用RNAse free 或者DEPC 处理，一般干净的新离心管即可。也可使用RNA吸附柱配套的新的干净收集管）， 在基因组清除柱内加入500 μL裂解液RLT Plus，13,000 rpm 离心30秒，收集滤过液。
7. 用微量移液器较精确估计滤过液体积，加入0.5倍滤过液体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
8. 将上述混合液转移至一个吸附柱CR3中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm 离心2分钟，弃掉废液。
9. 向吸附柱CR3中加入700 μL去蛋白液RW1，室温放置1分钟，13,000rpm离心30秒，弃掉废液。
10. 向吸附柱CR3中加入加入500 μL 漂洗液RW (请先检查是否已加入无水乙醇)，13,000 rpm离心30秒，弃掉废液。加入500 μL漂洗液RW，重复一遍。
11. 将吸附柱CR3放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟。尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
12. 取出吸附柱CR3转入一个新的RNase free离心管中，向吸附柱膜中央悬空滴加30-50 μL RNase-free H₂O，室温放置1分钟，12,000 rpm离心1分钟。
13. 如果预期RNA产量>30 μg，加30-50 μL RNase-free H₂O重复步骤12，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍 (如果需要RNA浓度高)。
注意：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积最好不少于30 μL，体积过小降低RNA洗脱效率，减少RNA产量。
注意：以下步骤都可以帮助提高RNA产物浓度：
（1）RNase-free ddH2O于90℃预热；
（2）将第一次洗脱液重新加入吸附柱进行洗脱。
14. 提取的RNA可直接用于下游实验或-85至-65°C保存。
