【储存条件】 -20˚C。Sgel
【产品简介】
SgeI是一种甲基化敏感型限制性内切酶，能够特异性水解单链或双链DNA中携带5-甲基胞嘧啶修饰的特异性靶位点。该酶通过识别 5'C NNG 非对称序列（切割位点位于识别区下游9和13个碱基处），在配套的专用反应缓冲液体系中，37℃温育条件下可达到最优酶切效率。本产品存储缓冲液预混牛血清白蛋白（BSA），一方面通过稳定酶蛋白构象维持长效活性，另一方面可中和样本中潜在的抑制因子（如去污剂或金属离子），保障不同批次实验的重复性。
【识别位点】
【产品组分】
【适用范围】 分子克隆，限制位点作图，基因分型，Southern印迹
【操作示例】
1. DNA快速酶切流程
a. 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
* 反应体系可以按比例放大或缩小。反应时间不建议超过1h。
b. 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
c. 37℃温育1h；
d. 80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）。
【甲基化修饰影响】
【酶活定义】 在1×Buffer条件下，1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+) 在50μL反应体系中37℃孵育1h，不断增加酶量，直至酶切产物DNA带型不随着酶量的增加而发生变化，此时酶量定义为1U。
【质量控制】
1. 核酸内切酶残留检测：
将3U Sgel与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h，通过DNA电泳检测质粒无变化。
2. 核酸外切酶残留检测：
将5U Sgel与双链DNA底物在37℃温育1h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
【注意事项】
1. 底物至少需要2个SgeI识别序列才能有效酶切；
2. 甲基化DNA完全酶切取决于SgeI的识别位点的数量，另外由于识别位点酶切产生的DNA产物会促进 SgeI的非特异性酶切，因此建议酶切时优化SgeI酶量用于酶切反应。
