【储存条件】 -20˚C。
【产品简介】
BsmBI是一种高活性Type IIs型限制性内切酶，能够特异性识别非回文序列，并在识别位点外的远端位置进行精准切割，是Golden Gate DNA无缝组装技术的核心工具。本产品提供经严格优化的专用反应缓冲液，其中添加重组白蛋白成分，可显著增强酶稳定性与反应兼容性，确保BsmBI在多种复杂体系中保持高效切割活性，适用于高精度DNA克隆、多位点片段组装及合成生物学构建等应用场景。
【识别位点】
【产品组分】
【操作示例】
a. 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
*DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响BsmBI酶活性。
b. 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
c. 55℃温育15min~1h，一般推荐5U~10U酶/μg质粒DNA、10U~20U酶/μg基因组DNA，温浴1h，如需过夜酶切反应，请将酶量调整至1U；
d. 80℃温育20min即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。
【甲基化修饰影响】
【活性定义】 1活性单位 (U) 是指在50μL反应体系中，55℃ 1h内完全酶切1µg λDNA所需的酶量。
【质量控制】
1. 超长时间温育检测：
最适反应温度下，将10U BsmBI与1μg λDNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。
2. 酶切 - 连接 - 再酶切检测：
最适反应温度下，使用10U BsmBI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量Fast T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
3. DNase残留检测：
将10U BsmBI与双链DNA底物在37℃温育16h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
【注意事项】
1. 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；
2. 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。
